简介:摘要目的初步建立抗新型冠状病毒受体结合域(receptor-binding domain, RBD)IgG定量ELISA检测方法,用于COVID-19静注人免疫球蛋白生产中原料血浆、原液和成品的效价检测。方法将已知的具有中和活性的COVID-19康复者恢复期血浆作为参比标准品,选用RBD抗原包被的间接ELISA试剂盒,采用双对数拟合曲线建立定量ELISA,确定其最佳线性范围;制备室内质控品,并对其进行标定;对该方法进行稀释线性、平行性、准确度、精密度验证。用建立的方法对3批COVID-19静注人免疫球蛋白的原料血浆、原液及成品进行检测,并与化学发光法及中和实验结果进行相关性分析。结果确定标准曲线线性范围为稀释倍数1~8、批内准确度88.50%~108.58%,批间准确度100.63%~103.98%;批内精密度3.83%~14.68%,批间精密度5.67%~13.15%;标准品和原料血浆、原液、半成品的平行性好。ELISA效价与化学发光法及中和实验相关性较好。结论成功建立抗新型冠状病毒RBD IgG定量ELISA检测方法,可用于COVID-19静注人免疫球蛋白的效价检测,作为内部放行方法。
简介:摘要目的探讨COVID-19康复者恢复期血浆及COVID-19静注人免疫球蛋白(human intravenous immunoglobulin,IVIG)(COVID-19-IVIG)IgG及亚类的水平。方法选择2020年2月至3月国药集团武汉血液制品有限公司采集的COVID-19康复者恢复期血浆及制备的COVID-19-IVIG作为研究组,选择健康者单采血浆及IVIG作为对照组。采用免疫比浊法检测并比较免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)及IgG亚类水平。分析COVID-19-IVIG中IgG亚类与其他蛋白之间的相关性。结果健康者单采血浆的IgG3、IgG4水平显著高于恢复期血浆(P<0.05),但IgG1、IgG2水平差异无统计学意义(P>0.05)。恢复期血浆IgM水平与血型〔相关系数(r)=0.649〕、抗体效价(r=0.696)呈正相关(P<0.05),IgG1(r=0.745)、IgG2(r=0.952)水平与IgG呈正相关(P<0.05)。COVID-19-IVIG的IgG1/∑4i=1 IgGn显著高于恢复期血浆(t=3.633,P<0.05),而IgG4/∑4i=1 IgGn显著低于康复者混合血浆(t=-4.899, P<0.05),两组间IgG2/∑4i=1 IgGn和IgG3/∑4i=1 IgGn差异无统计学意义(t值分别为-0.974和-0.280,P值均大于0.05)。COVID-19-IVIG与IVIG的IgG亚类分布差异无统计学意义(P>0.05)。在COVID-19-IVIG中,仅IgG2水平与α2巨球蛋白呈负相关(P<0.05)。结论恢复期血浆IgG亚类水平与健康者单采血浆有一定差异。COVID-19-IVIG制备过程中存在IgG亚类水平的变化,COVID-19-IVIG IgG亚类齐全,与IVIG IgG亚类水平相近。
简介:摘要目的建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)灭活血浆的工艺及其质量标准。方法采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆,开展2019-nCoV、HIV和梅毒螺旋体等病原体的筛查,进行亚甲蓝光照灭活,并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子Ⅷ活性等,判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。结果亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化,血浆的凝血因子Ⅷ含量≥0.50 IU/ml,抗体滴度未出现明显下降,各项检测结果均符合质量要求。结论确立了以COVID-19康复者恢复期血浆制备抗2019-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。