摘要
目的了解钙离子对人永生化KC株HaCaT细胞整合素β1启动子活性、蛋白表达及细胞迁移的影响.方法（1）体外培养HaCaT细胞（12孔板）,按随机数字表法分为5组,每组18孔.分别用pGL3启动子（阳性对照组）、pGL3空载体（阴性对照组）及pGL3-1756bp（全长启动子组）、pGL3-1442bp（远端启动子组）、pGL3-261bp（近端启动子组）报告质粒转染HaCaT细胞,转染分别在含0.00、0.03、0.09、0.30、0.80、1.20mmol/L钙离子的无血清RPMI1640培养液中进行（每组每种浓度3孔）.24h后用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶相对活性.（2）取本室构建的稳定转染小干扰RNA-整合素β1载体（简称稳定转染）的HaCaT细胞,常规培养后按随机数字表法将细胞分为6部分,用前述6种浓度钙离子处理,每种浓度3个样本.采用蛋白质印迹法检测整合素β1蛋白表达水平.（3）于6孔板中培养正常HaCaT细胞和稳定转染的HaCaT细胞,每种细胞18孔.按常规进行划痕处理后,用含前述6种浓度钙离子的培养液（按随机数字表法划分.每种浓度3孔细胞）培养12h.观察并检测细胞迁移率.（4）对各实验结果进行单因素方差分析和独立样本t检验.结果（1）全长启动子组细胞在钙离子浓度由0.00mmol/L升至0.09、0.30mmol/L时,荧光素酶相对活性由0.16±0.09升至0.39±0.09、0.35±0.05（t值分别为3.143、3.140,P值均小于0.05）;当钙离子浓度升至0.80、1.20mmol/L时,荧光素酶活性下降.远端启动子组细胞荧光素酶相对活性随钙离子浓度变化的趋势与全长启动子组相似,但在0.09、0.30mmol/L时,该酶活性分别为0.56±0.32和0.64±0.06,明显高于全长启动子组（t值分别为0.887、6.122,P值均小于0.05）.各种浓度钙离子对近端启动子组荧光素酶相对活性无明显影响.（2）当钙离子浓度为0.00mmol/L时,稳定转染的HaCaT细胞整合素β1蛋白表达量为0.53±0.10.当钙离子浓度为
出版日期
2010年03月13日（中国Betway体育网页登陆平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
