摘要
摘要目的探讨CCAAT增强子结合蛋白(CEBPB)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达情况及其与ccRCC临床特征的关系，并检测CEBPB基因对ccRCC细胞增殖和侵袭活性的影响。方法本研究于2020年3—12月完成。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载537例ccRCC患者的转录组数据和临床数据。男346例，女191例；≤60岁266例，>60岁271例；G1~2级244例，G3~4级285例，未确定分级8例；T1~2期344例，T3~4期193例；N0期240例，N1期17例，无法评估淋巴结转移情况280例；M0期426例，M1期79例，无法评估远处转移情况32例；生存367例，死亡170例。分析CEBPB mRNA在ccRCC组织中的表达及其与临床特征的相关性；单因素和多因素Cox回归分析CEBPB表达水平对ccRCC患者生存预后的影响；肿瘤免疫浸润评分(TIMER)数据库分析CEBPB表达与免疫细胞浸润的相关性。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测CEBPB mRNA和蛋白在人肾小管上皮细胞株HK2和ccRCC细胞株(Caki-1、ACHN、786O、769P和A498)中的表达；利用脂质体转染ACHN细胞和786O细胞，实验分为对照组、阴性对照siRNA (NC siRNA)组和CEBPB siRNA组。转染后48 h，分别通过MTT实验和侵袭实验检测各组ACHN细胞和786O细胞的增殖和侵袭活性。结果TCGA数据库资料分析结果显示，与正常肾脏组织比较，ccRCC组织中的CEBPB mRNA表达水平上调2.55倍(P<0.05)。CEBPB表达水平与ccRCC患者年龄、肿瘤分级、肿瘤分期、淋巴结转移及远处转移呈正相关(P<0.05)，且肿瘤分级(HR＝1.703，P＝0.040)、肿瘤分期(HR＝1.773，P＝0.026)、远处转移(HR＝3.080，P<0.001)和CEBPB高表达(HR＝1.874，P＝0.003)是影响ccRCC患者预后的独立危险因素。TIMER数据库分析结果表明，CEBPB表达水平与B细胞(Rho＝0.168)、M2型巨噬细胞(Rho＝0.373)、调节性T细胞(Rho＝0.348)、中性粒细胞(Rho＝0.194)和自然杀伤T细胞(Rho＝0.421)的浸润程度呈正相关。Caki-1、ACHN、786O、769P、A498细胞中CEBPB mRNA表达水平分别是HK2细胞中的(9.43±1.25)、(5.44±0.82)、(4.50±0.52)、(4.88±0.73)、(7.50±1.04)倍，CEBPB蛋白表达水平分别是HK2细胞中的(6.22±0.45)、(5.84±0.85)、(6.51±0.55)、(6.23±0.62)、(3.84±0.45)倍，差异均有统计学意义(P<0.05)。MTT实验结果显示，NC siRNA组中ACHN细胞在培养24、48、72、96 h后细胞增殖率分别为(98.4±1.7)%、(97.8±2.1)%、(101.3±1.2)%、(97.5±2.0)%，786O细胞增殖率分别为(99.0±1.4)%、(98.5±1.5)%、(97.6±1.7)%、(99.1±1.3)%；CEBPB siRNA组中，ACHN细胞在培养24、48、72、96 h后细胞增殖率分别为(68.8±5.8)%、(57.9±6.1)%、(50.9±4.6)%、(43.2±5.0)%，786O细胞增殖率分别为(79.5±6.2)%、(70.8±5.1)%、(66.8±4.9)%、(60.5±5.3)%。与NC siRNA组比较，CEBPB siRNA组ACHN、786O细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05)。细胞侵袭实验结果显示，NC siRNA组ACHN、786O细胞的侵袭活性分别为对照组的(95.0±5.2)%、(97.3±4.4)%，CEBPB siRNA组ACHN、786O细胞的侵袭活性分别为对照组的(35.2±5.4)%、(26.7±3.3)%。与NC siRNA组比较，CEBPB siRNA组ACHN、786O细胞的侵袭活性明显受到抑制(P<0.05)。结论CEBPB在ccRCC中高表达，且CEBPB表达水平与ccRCC患者生存预后及免疫浸润密切相关，沉默CEBPB表达显著抑制ccRCC细胞的增殖和侵袭。
出版日期
2021年12月19日（中国Betway体育网页登陆平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
